流式细胞仪微生物应用.ppt
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1、BD Technologies 流式细胞仪与微生物研究BD BiosciencesBD BiosciencesBD Technologies 流式细胞仪可以用来干什么流式细胞仪可以用来干什么?染色体微生物:细菌、病毒、真菌血细胞原生动物细胞BD Technologies 流式细胞仪流式细胞仪-了解细胞的特征了解细胞的特征BD Technologies 流式细胞仪如何检测细菌?流式细胞仪如何检测细菌?细菌自发荧光标记不同的荧光素(蛋白、核酸等)散射光强阳性弱阳性阴性BD Technologies 流式细胞仪如何检测细菌?流式细胞仪如何检测细菌?在流动的状态中检测细菌各种物理及生物特征;Injec
2、tor Tip荧光信号聚焦的激光光束鞘液细胞BD Technologies 流式细胞仪上检测两类信号流式细胞仪上检测两类信号散射光信号主要反映细胞大小和内部结构如颗粒荧光信号来自于荧光素:荧光素标记细胞成份如蛋白和DNA来自于细胞自发荧光BD Technologies 前向角散射光信号前向角散射光信号前向角检测器前向角检测器激光激光细胞细胞BD Technologies 侧向角散射光信号侧向角散射光信号前向角检测器前向角检测器侧向角检测器侧向角检测器激光激光BD Technologies 荧光信号荧光信号BD Technologies PMTPMTPMTPMT滤片滤片带通滤片带通滤片流式细胞仪
3、原理流式细胞仪原理激光激光1234流动室流动室检测器光电倍增管BD Technologies 荧光信号荧光信号BD Technologies 荧光信号荧光信号BD Technologies 流式细胞仪的数据分析流式细胞仪的数据分析常用图形单参数直方图 双参数点图BD Technologies 流式细胞仪的应用流式细胞仪的应用临床医学微生物学海洋渔业食品酿酒畜牧体育科学农业林业化工BD Technologies 流式细胞仪在微生物学的应用历史流式细胞仪在微生物学的应用历史最早期流式细胞仪,被用于检测矿尘中的浮质颗粒二次世界大战中美军实验室检测细菌和孢子40年代末,报导显示流式细胞仪可用于检测生物
4、样本(细菌)、悬浮在空气中及浮质中的颗粒70年代,随着商业流式细胞仪的发展,用流式细胞仪研究哺乳类生物细胞发展迅速随着流式细胞仪光学系统的改进及发现新的荧光素,流式细胞仪在微生物学中的应用开始发展上世纪90年代末,微生物学对流式细胞仪的应用快速发展起来BD Technologies 流式细胞仪在微生物研究中的应用流式细胞仪在微生物研究中的应用DNA蛋白过氧化物生成胞内pH鉴别死/活细菌和酵母菌并计数区分革兰氏阳/阴性细菌研究酵母菌细胞器基因表达-绿色荧光蛋白病原菌与吞噬细胞的关系-吞噬引起的呼吸爆发病毒-细胞相互作用:病毒感染导致细胞蛋白表达的改变,对细胞周期的干扰,对细胞内钙离子水平的影响病
5、毒引起的凋亡BD Technologies 流式细胞仪在微生物中的应用流式细胞仪在微生物中的应用鉴别细菌的活性环境、饥饿对细菌膜电位的影响可以通过荧光素标记区分死细菌、活细菌自发荧光利用NADPH和黄素的自发荧光作为代谢状态的标记细菌分类通过两个参数:散射光信号和荧光信号(与细胞成份如蛋白或DNA结合的荧光素发出的信号)或自发荧光BD Technologies 细胞生理学研究细胞生理学研究细菌分类BD Technologies 流式细胞仪在微生物中的应用流式细胞仪在微生物中的应用细菌分类BD Technologies 流式细胞仪在微生物中的应用流式细胞仪在微生物中的应用不同的藻类分群BD Te
6、chnologies 流式细胞仪在微生物中的应用流式细胞仪在微生物中的应用根据生理状态的功能将细胞分类增殖活性、代谢活性、膜完整性分类细胞胞膜内外形成电位差。完整极化的有主动转运系统的细胞膜是健康、功能良好的细胞的基本条件。本来不能通透的染料进入胞内,反映了胞膜的受损。主动转运系统停止时,BOX染料进入胞内胞膜受损时,PI染料与DNA结合EB可进入胞内,但被健康的细胞泵出BD Technologies 流式细胞仪在微生物中的应用流式细胞仪在微生物中的应用根据生理状态的功能将细胞分类大肠杆菌在600加热30秒后用PI和BOX染色健康细胞失去膜电位细胞通透细胞BD Technologies 流式细
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