蝉花子实体的免疫调节作用及其机制.doc

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1、硕士学位论文蝉花子实体的免疫调节作用及其机制 专 业 名 称： 卫生毒理学 研究生姓名： _导 师 姓 名： IMMUNOLOREGULATION EFFECT AND MECHANISM OF FRUITING BODIES OF CORDYCEPS DIDADAEA Dissertation Submitted toSoutheast UniversityFor the Academic Degree of Master of MedicineBYDu JinshaSupervised byResearcher Wang MinshengSchool of Public HealthSou

2、theast UniversityMay 2013东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名： 日期： 东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的

3、内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括以电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研究生院办理。研究生签名： 导师签名： 日期： word文档 可自由复制编辑蝉花子实体的免疫调节作用及其机制摘要蝉花（Cordyceps didadae）是蝉在土壤中的若虫被麦角菌科真菌大蝉草的分生孢子寄生致死的带菌尸体。蝉花含有17种氨基酸、丰富的矿物元素和多种生物活性成分，近年来研究发现蝉花有显著双向免疫调节作用，能选择性杀伤癌细胞，显著抑制肺癌细胞生长等生理学作用。目前，蝉花食用情况、安全性评价尚无较全面的调

4、查和研究报告，对于人工培养蝉花子实体的生理学作用研究较少且分散不成系统，对其生理学作用机制的研究也不深入。鉴于此，本课题进行了我国蝉花主要生长地居民对于蝉花的食用习惯调查，系统地对蝉花子实体的急性毒性、致突变性、生殖毒性、亚慢性毒性做了评价，进而从免疫调节作用方面入手，以小鼠为实验对象，进行了蝉花子实体的免疫调节作用研究并通过小鼠脾淋巴细胞增殖试验、T淋巴细胞亚群分析、NK细胞杀伤活性试验、细胞因子水平检测等方法初步探讨其可能机制。通过本研究，可初步得出以下结果： 1.蝉花虽然是一种优质虫草，但居民对其知晓度较低，对其功效了解不够，多数调查者表示愿意尝试蝉花保健品，显示了蝉花具有潜在的广阔市场

5、前景。2.蝉花子实体安全性评价研究中，小鼠急性经口摄入最大耐受剂量为15 000mg/kg，毒性分级属无毒级；对标准测试菌TA97、TA98、TA100和TA102均未检出明显的诱变活性；对小鼠骨髓嗜多染红细胞无诱发微核作用；对雄性小鼠未检出精子诱变活性。2 000mg/kg、4 000mg/kg、8 000mg/kg各剂量组大鼠在90d喂养试验中每周体重、总进食量和总食物利用率与对照组值比较,均无显著性差异(P0.05)；各剂量组雌雄大鼠脏器绝对重量、脏体比与对照组比较无显著性差异(P0.05) ；雌雄各剂量组的血液学指标检测值、生化指标检测值均在正常波动范围内；各剂量组雌雄大鼠病理组织学检

6、查未显示有不良影响。蝉花子实体90天喂养试验雌雄大鼠实际摄入的最大未观察到有害作用剂量(NOAEL)分别为8583、7027mg/kg b.wt(分别相当于推荐剂量的257和211倍)。 3.在蝉花子实体免疫调节作用的研究中，蝉花子实体喂养小鼠45d后可见巨噬细胞吞噬指数提高，脾脏、胸腺指数不同程度增大，DTH反应增强等免疫功能增强表现。另外，高剂量蝉花子实体可引起小鼠血清抗体生成降低，不同剂量组外周血IgG、IgM水平变化不同，提示蝉花子实体对机体体液免疫有调节作用，并且高剂量可能引起免疫抑制。4.在蝉花子实体免疫调节机制研究中，蝉花子实体对经诱导的小鼠脾细胞和非诱导脾细胞都有一定程度的促增

7、殖作用，对外周血淋巴细胞中CD3+、CD8+以及CD4+/CD8+以及细胞因子水平都有一定程度的影响，能提高NK细胞杀伤活性。 本课题研究结果表明，人工培养的蝉花子实体作为药食同源真菌，安全无毒，能提高小鼠脾脏、胸腺等免疫器官指数，对机体细胞免疫和体液免疫功能具有一定的调节作用，其调节机制包括调节脾淋巴细胞增殖、影响T淋巴细胞中CD3+、CD4+、CD8+以及CD4+/CD8+比例，影响外周血IL-4等细胞因子水平以及增强NK细胞杀伤活性等。但蝉花的人群知晓度不高，其开发和利用有广阔的潜在市场。关键词：蝉花子实体；知晓度；免疫调节；免疫调节机制；细胞因子；淋巴细胞亚群；NK细胞word文档 可

8、自由复制编辑Immunoloregulation Effect and Mechanism of Fruiting Bodies of Cordyceps didadaeAbstractCordyceps didadae is a kind of parasitic fungus which grows on the larvae of Cicada flammata Dist. Cordyceps didadae includes 17 kinds of amino acid, rich mineral micro-elements and bioactive components. Rec

9、ently, researchers have found that Cordyceps didadae can postpone chronic renal failure and prevent the progression in the rat glomerulosclerosis model. Cordyceps didadae is also reported to have antibacterial activity and distinct two-ways immunoloregulation. It was found that extract from Cordycep

10、s didadae can selectively kill lung cancer cells in stage G2/M and significantly inhibit the growth of cancer cells. Cordyceps didadae is gradually known as a fine quality cordyceps fungus and its artificial cultivation has broad application future. Theres no research paper about the consumption of

11、Cordyceps didadae or about its security as food so far. Research on the physiological effect of its artificial cultivation is sketchy , the same thing is with study on the physiological mechanism. In view of this, we chose to do some research work about the consumption and security of Cordyceps dida

12、dae and to study on its immunoloregulation effect and mechanism.In this research, we gathered up awareness data of Cordyceps didadae in its producing area via scientific investigation. And then, we did the following researches using the fruiting bodies of Cordyceps didadae as reaearch subject and mi

13、ce as the object :assessed its acute toxicity,mutagenicity,genotoxicity and subchronic toxicity systematically through a series of experiments;assessed its effect on immune regulation function;explored its immunoloregulation mechanism through lymphocyte proliferation test, analysis of T lymphocyte s

14、ubsets, NK cell cytotoxicity test and detection of cytokines. In this study, we can get the results as follows:1. Residents awareness about Cordyceps didadae is low and very few persons know its biological activity.Most respondents represented that they would try health products of Cordyceps didadae

15、. The result shows a huge potential market for it.2. In the safety evaluation study, the mice acute oral ingestion of maximum tolerated dose (MTD)is 15 000mg/kg, so the toxicity grading of Cordyceps didadae is non-toxic; None of the four test bacterias (TA97,TA98,TA100 and TA102)was mutated; polychr

16、omatic erythrocyte micronucleus of mice bone marrow were not increased; the rate of teratosperm in male mice is normal. In 90days feeding test, Compared with control group, the body weight,the total food intake and the total food utilization rate of each Cordyceps didadae dosage group was not signif

17、icantly different(P0.05). Same case is with organ weight and organ-body ratio. Hematology index and biochemistry index of male or female rat were in nomal range of fluctuation. Histopathological examination of high dose rat didnt reveat pathological changes.In 90days feeding test, the NOAEL of male

18、rat and female rat are 7027mg/kg b.wt and 8583mg/kg b.wt.3. In the immunoloregulation tests, the phagocytic index of macrophage in mice increased; spleen and thymus index increased to varying degrees; DTH reaction was enhanced.The humoral immunity function was influenced and high dosage could depres

19、sing it.4. In the immune regulation mechanism study,we found that for both activated and unactivated splencytes ,the proliferation were increased;the proportion of CD3+,CD4+,CD8+ and CD4+/CD8+ in peripheral blood lymphocyte were affected;the killing activity of NK cells was increased.Finally, the co

20、nclusions can be drawn by the results above, it suggest that Cordyceps didadae is safety and may regulate both humoral immunity and cellular immunity.The mechanisms include regulate the splencytes proliferation and so on.Keywords: fruiting bodies of Cordyceps didadae; Awareness; immune regulation; i

21、mmunolo- regulation mechanism; cytokine; lymphocyte subsets; NK cellword文档 可自由复制编辑目录前 言1第一章 蝉花食用习惯调查31调查问卷的设计与实施32结果43讨论7第二章 蝉花子实体的安全性评价9第一节 小鼠急性经口毒性试验91 材料与方法92 结果10第二节 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）101 材料与方法102 结果11第三节 小鼠骨髓微核试验131 材料与方法132 结果15第四节 小鼠精子畸形试验151 材料与方法152 结果17第五节 大鼠90天喂养试验171 材料与方法172 结果19第六节

22、讨论311 蝉花子实体的毒性分级312 蝉花子实体的致突变性313 蝉花子实体的生殖毒性314 蝉花子实体的亚慢性毒性32第三章 蝉花子实体免疫调节作用的研究33第一节蝉花子实体对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响331 材料与方法332 结果35第二节蝉花子实体对DNFB诱导的DTH反应的影响351 材料与方法352 结果36第三节蝉花子实体对SRBC诱导的小鼠血清抗体生成的影响361 材料与方法362 结果37第四节蝉花子实体体外对小鼠外周血IgG、IgM水平的影响371 材料与方法372 结果38第五节讨论381 蝉花子实体对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响382 蝉花子实体对小鼠迟发型

23、超敏反应的影响393 蝉花子实体对小鼠血清抗体生成的影响394 蝉花子实体对血清中IgG、IgM水平的影响39第四章 蝉花子实体对小鼠免疫调节机制的研究41第一节蝉花子实体对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响411 材料与方法412 结果42第二节蝉花子实体对小鼠T淋巴细胞亚群的影响441 材料与方法442 结果44第三节 蝉花子实体对小鼠血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-等细胞因子水平的影响451.材料与方法452 结果46第四节 蝉花子实体对小鼠NK细胞杀伤活性的影响461 材料与方法462 结果47第五节 讨论481 蝉花子实体对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响482 蝉花子实体对

24、小鼠T淋巴细胞亚型及细胞因子的影响483 蝉花子实体对小鼠NK细胞杀伤活性的影响49总 结50参考文献51作者简介59致 谢60主要缩略词表英文缩写英文全称中文名称APTTThromboplastin time凝血活酶时间DMSODimethyl sulfoxide二甲基亚砜DNFB2,4-dinitro fluoro benzene二硝基氟苯DTHdelayed type hypersensitivity迟发型超敏反应HGBHemoglobin血红蛋白LDHLactate dehydrogenase乳酸脱氢酶MACMembrane attack complexes 攻膜复合物MTDMaxim

25、um Tolerated Dose最大耐受剂量MTT3-(4,5-dimethyl)-2,5-diphenyl-2H四甲基氮唑蓝NCENormochromatic erythrocytes正染红细胞NOAELNo observable adverse effect level最大未观察到有害作用剂量PBSPhosphate-buffered saline磷酸盐缓冲盐溶液PCEPolychromatic erythrocyte嗜多染红细胞PLTPlatelet血小板PTProthrombin time凝血酶原时间1,8-DHAQ1,8-Dihydroxyanthraquinone1,8-二羟基蒽

26、酮2-AF2-aminofluorene2-氨基芴 word文档 可自由复制编辑前 言真菌是一类具有真正细胞核、没有叶绿素、形态差异很大的一类生物。一般能进行有性或无性繁殖，通常营养菌丝呈分枝状的丝状体，并能产生孢子。全世界已知真菌有20多万种，我国至少有10万余种，已报道的有8 000种左右1。药用真菌是指能显著改善人体生理机能，对疾病具有预防和治疗作用的一类真菌，广义的药用真菌包括中医药中的大型真菌及产抗菌素真菌（常为小型真菌，通常利用菌丝体发酵分离得到目的产物作为药物），而狭义的药用真菌仅指子实体、菌核或菌丝体直接作药用的真菌，如茯苓、灵芝、僵蚕、香菇、冬虫夏草、银耳等2。我国已报道的有

27、药用价值的真菌有300多种，而真正作为药物使用的只有2030种，是大型真菌种类中的极少部分3。我国真菌资源物产丰富，有品种繁多的食、药或药食同源的真菌资源，利用真菌作为食、药物具有悠久历史。常见的药食同源真菌有香菇、木耳、茯苓、冬虫夏草等。近年来随着世界各国保健食品的飞速发展，传统药食同源真菌作为保健食品的原料日益受到重视，并被广泛开发利用。天然原料食药用真菌含有多糖及其衍生物（尤其是肽多糖）、萜、生物碱、甾醇、蛋白质等极为丰富的生物活性物质，具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂、调节机体免疫、保护心脑血管等多种保健功能2,4,5。蝉花（Cordyceps didadae）是蝉在土中的若虫被麦角菌科真菌

28、大蝉草的分生孢子寄生致死的带菌尸体6，主要生长于亚洲的热带、亚热带地区的针阔叶混交林带，在我国长江以南多省都有野生资源。蝉花虫体长呈椭圆形，微弯曲，形似蝉蜕，头部有数枚灰黑色或灰白色的孢梗束，呈长条形，卷曲有分支，质脆，虫体表面棕黄色7。从已发表的研究报告来看，蝉花中含有17种氨基酸，其中人体必需的8种氨基酸所占比例高达38.8%，总氨基酸含量比冬虫夏草高8；蝉花含有丰富的矿物元素，如钙、铁、锌、硒等，这些矿物元素在机体生长发育、生殖、神经内分泌、免疫、物质代谢、血液、消化、造血等方面发挥着重要作用，而且在抗氧化、抗衰老等方面也有着举足轻重的作用；蝉花中含有多糖、甘露醇、腺苷、虫草素、甾醇类化

29、合物、多球壳菌素、环肽类化合物等多种生物活性成分，温鲁等将蝉花与冬虫夏草和蛹虫草一起进行主要活性成分的测定和比较，发现蝉花中虫草酸和腺苷含量高于冬虫夏草，多糖和虫草酸含量高于蛹虫草9；蝉花中不饱和脂肪酸是优势脂肪酸，属于优质虫草。我国中医学临床经验发现蝉花对于治疗眼角膜溃疡、糖尿病视网膜病变、春季结膜炎等眼疾有较好作用10-12，蝉花菌丝体对大鼠肾小管间质纤维化有较好的干预作用，并能有效延缓大鼠肾小球硬化、慢性肾衰竭进程13-15，蝉花对降糖、治疗糖尿病肾病有一定的药理功效，为筛选糖尿病药物提供了指导方向16；蝉花中的多球壳菌素等有良好的抗真菌活性17，并能阻断白介素-2受体以下途径，特异性抑

30、制T细胞的增殖，比临床广泛应用的环孢菌素显示更强的活性，有显著双向免疫调节作用18,19；蝉花粗提物能选择性杀伤G2/M期肺癌细胞，显著抑制肺癌细胞生长20。由于野生蝉花受生长环境条件的限制，产量非常有限，价格昂贵，居民知晓度不高，因此对于蝉花的研究主要集中在我国，国外鲜见报道。目前来看，科技工作者对于蝉花的研究往往侧重于其某一方面，很少有较系统、深入的研究。但近年来随着人工发酵培养技术的不断成熟和工业化，也使得原本珍贵稀缺、成本高昂的野生真菌资源被药用价值相当而成本低廉的人工培养品替代成为可能，人工培养蝉花也显示出更广阔的开发前景：(1)蝉花真菌的分离培养可分为孢子分离法、子座分离法和组织分

31、离法，可实现蝉花真菌菌丝的实验室培养21-23，工业化生产也为其开发利用开辟了广阔前景24-26。(2)野生蝉花与人工培养品的氨基酸、无机元素组成和含量上虽然存在差异，但临床和实验室研究发现人工培养品药理作用不亚于野生蝉花27-29，且其无机元素、虫草多糖含量高于野生蝉花30。(3)蝉花发酵液或人工培养后的废弃培养基中含有生物活性成分，可以作为保健功能饮料或饲料成分，实现人工培养蝉花的多元化利用31,32。目前，蝉花食用情况尚无较全面的调查报告，对于人工培养蝉花子实体的生理学作用的研究很少且较分散不成系统，对其生理学作用机制的研究也不深入，难以满足蝉花人工培养品的开发需求。鉴于此，本研究对蝉花

32、生长地居民进行知晓度调查，对其安全性进行实验评价，并以人工培养的蝉花子实体为研究对象， 从蝉花的免疫调节方面切入，对其免疫调节作用及机制进行了系统研究，旨在为今后蝉花人工培养品的开发利用提供一定的实验依据。研究共分四部分：1.蝉花食用习惯调查（知晓度和消费状况调查）为了了解蝉花的食用状况，参考国内外相关问卷合理设计调查问卷，对蝉花主要生长所在地居民对蝉花的消费量情况和知晓程度进行调查。2.蝉花子实体的安全性评价 通过急性经口毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验及大鼠90天喂养试验等，系统全面地对蝉花子实体的安全性进行评价。3.蝉花子实体对小鼠免疫调节作用的研究 通过实验评

33、价蝉花子实体对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、对DNFB诱导的DTH反应影响、血清抗体生成影响及血清中IgG、IgM水平影响。4.蝉花子实体对小鼠免疫调节机制的研究 用不同剂量的蝉花子实体灌服小鼠45d，无菌取脾脏细胞进行NK细胞杀伤活性及脾淋巴细胞增殖实验，并通过流式细胞术分析小鼠外周血T淋巴细胞亚群，ELISA法检测外周血血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-等细胞因子水平，探讨蝉花子实体对小鼠免疫调节作用的机制。word文档 可自由复制编辑第一章 蝉花食用习惯调查 蝉花主要生长于亚洲的热带、亚热带地区的针阔叶混交林带，在我国安徽、浙江、福建、云南、广东、四川等地都有分布33

34、,34。国内外对于蝉花的药用价值研究发现蝉花具有镇静镇痛、抗肿瘤、抗辐射、免疫调节等作用。近年来，随着工业化发酵技术日渐成熟，蝉拟青霉液体发酵技术日益成熟，目前已可人工发酵生产蝉花子实体。人工发酵的蝉花子实体与野生蝉花、冬虫夏草具有相似的药理作用，但成本更低，有望成为冬虫夏草的平价替代品。然而我国居民对蝉花的知晓度不高，蝉花食用情况目前尚无较全面的调查报告。为了了解蝉花的食用状况，在蝉花主要生长地进行了当地居民对蝉花知晓度及消费量情况的调查。1 调查问卷的设计与实施1.1 调查目的 为了解蝉花主要生长地居民对蝉花的知晓度和消费情况，并分析不同地区居民对蝉花健康产品的态度情况，进行此调查，可为进

35、一步开发蝉花健康产品市场提供基础资料和参考。1.2 调查地区及调查对象 目前就全国而言，了解蝉花的人群不多，所以选择蝉花的生长地及产地来研究比较有意义。因此选择广东省的梅州、河源、湛江和广州，浙江省的漳州和南靖，云南兰坪县等7个地区作为调查地区。调查对象为当地居民。1.3 调查内容与方法 根据研究目的，参考国内外相关问卷合理设计，在咨询专家的基础上制作初稿，经过预调查，对不足之处及时改正，并最终确定问卷内容。问卷包括两个方面内容：基本情况（5题）、对蝉花认知情况（11题）。方法是在所调查地区的当地居民采取偶遇调查，并以一对一的形式发放问卷。1.4 数据处理 回收问卷，采用epidata进行数据

36、录入（双人双机）。利用统计学知识对数据进行整理与分析，获得居民蝉花知晓率和消费情况，检验各地区的差异性。2 结果表1.1 问卷发放及回收情况调查问卷（份）有效问卷（份）有效率（%）梅州12011595.8河源23623197.9湛江19518594.9广州209209100漳州484695.8南靖3030100兰坪11511196.52.1问卷发放及回收情况 见表1.1。有效问卷筛选的依据：调查对象的性别信息完全者为有效问卷，否则为无效问卷。2.2一般情况 本次调查涉及调查对象的基本资料主要包括性别、年龄、职业、文化程度及慢性疾病患病史。不同地区调查对象基本特征汇总见表1.2和图1.1。表1.

37、2不同地区调查对象基本情况地区性别（%）年龄（%）文化程度（%）职业（%）男女20岁2030岁3145岁46岁文盲小学初中高中/大专大学以上农民工人教师学生干部医务人员待业退休梅州49.650.46.121.742.629.60.89.732.230.411.320.919.11.74.31.73.58.713.1河源43.956.16.924.745.922.54.310.433.836.810.44.318.52.67.46.52.610.47.4湛江48.151.94.338.438.418.91.17.018.939.532.47.013.54.320.05.48.14.94.9广州2

38、5.474.63.345.921.529.36.75.715.329.237.85.312.46.222.52.910.59.514.4漳州32.667.48.769.613.08.70.02.213.034.847.82.223.96.519.62.20.02.24.3南靖26.773.313.323.336.726.73.316.743.330.06.720.020.06.713.30.00.03.30.0兰坪45.055.03.628.818.948.725.311.726.115.315.343.29.92.73.69.02.70.05.4图1.1 各调查区男女比例 由图1.1可以直观

39、地看出7个地区（除梅州外）所调查的男女比例不均衡，女性所占比例偏高。表1.2中，从年龄的分布来看，梅州、河源、南靖三个地区调查对象主要分布在31-45岁之间；兰坪地区主要分布在46岁以上的人群中；广州地区集中于2030岁，而湛江地区则集中分布在2045岁之间。几个地区所调查的对象其文化程度除兰坪县外，大多是初中以上的文化水平，而兰坪县地区文盲所占的比例还是比较高的。7个地区调查对象所从事的职业，其中为干部、医务人员的人数都较少，其他职业分布较为广泛。 根据分析慢性病史的数据得出，几个地区的调查对象中，云南兰坪县有慢性病史的比例最高，为22.5%，其余依次为广州（13.8%）、梅州（13.0%）

40、，有慢性病史比例最低的地区是河源（比例为5.2%），其余依次为湛江（6.0%）、南靖（6.6%）、漳州（8.7%）。2.3各地区人群对蝉花的了解情况，见图1.2。 图1.2 7个地区对蝉花的知晓度 整体情况如图1.2所示，湛江和兰坪两地区的蝉花知晓度最高。具体分析如下：梅州调查的115份有效问卷中显示，有33.9%的人群听说过蝉花，26.1%食用过并多数在酒店菜桌的情况下食用的。男女所占比例较为平衡，这些人群中有41%是朋友告知的，33.3%是通过其他途径得知的；年龄多集中在3145岁之间。 河源调查的231份有效问卷中显示，有36.4%的人群听说过蝉花，21.2%食用过，多数是在其他情况下食

41、用的，比如自家煲汤。所调查的人群中，女性所占比例为59.5%，较高。年龄分布多集中在3145岁之间，其次是45岁以上的人群。 湛江调查的185份有效问卷中显示，有62.7%的人群听说过蝉花，44.7%食用过并多数在酒店菜桌的情况下食用的,其次是在医生处方中食用。所知人群中，男女比例较为均衡。年龄分布集中在3145岁之间。 广州调查的209份有效问卷中显示，仅20.1%的人群听说过蝉花，7.2%的人食用过并多数在医生处方中食用的。所知人群中，女性比例大，占了80.9%。年龄主要集中在2030岁之间。 漳州市区发放48份问卷中，有效问卷46份。结果显示有9人表示之前听说过蝉花，仅有3人服用过蝉花。

42、而在南靖市发放的30份问卷中，有14人知晓蝉花，年龄多数在46岁以上的人群中。 云南兰坪地区115份调查问卷中，超过一半（58.60%）的人是知道蝉花的，多数是通过朋友得知的，其中58.5%是女性。33.0%的人食用过蝉花并多数在酒店饭桌的情况下食用的。年龄分布集中于46岁以上的人群间。根据不同地区知晓率的情况发现，该7个地区居民对蝉花的知晓度差异有统计学意义，广东省湛江和云南兰坪这两个地区的知晓度高于其他5个地区（P0.05）。2.4人群对以蝉花为原料的保健产品的态度对市场上有无蝉花保健品的知晓程度，7个地区得到的结果大致一样，多数人没有听说、注意过，有很少的人知道市场上有蝉花保健品。而且对

43、蝉花保健功能的了解也甚少（梅州24.3%，河源19.9%，湛江44.9%，广州14.8%，云南兰坪39.6%，漳州46份问卷中有13人表示对蝉花功效有所了解，南靖30份问卷中仅有4人表示了解）。综合分析各地区居民对未来蝉花健康产品的市场需求及态度情况（结合以上7个地区，共927份有效问卷），从以下3个问题可以了解到： 对蝉花保健品倾向于什么包装？有26.6%的居民选择胶囊，42.8%倾向于口服液，12.4%选择粉剂。 对人工培养蝉花如何看待？28.1%的居民认为人工培养蝉花很好，这样能避免资源地过度开发；而43.8%的居民认为其没有野生的营养价值高，其他的居民表示无所谓。 对蝉花保健品如何看待

44、？所得到的数据中，有45.7%的居民认为蝉花保健品很好，可以尝试；25.4%的人表示不愿意尝试；有20.6%的人表示蝉花保健品的接受程度受价格的影响较大。3 讨论3.1 调查对象对蝉花的知晓度 总体来看，除广东湛江市和云南兰坪地区外，其他地区对蝉花的知晓度偏低，多数为民间偏方或菜系中食用，这可能与蝉花还未得到较为广度地开发有关。而且年龄分布除了广州外，其他地区大多数集中于中老年人群，文化程度不高。调查对象对蝉花的了解很少通过电视网络书籍等媒体中获得，对其功效几乎都没有全面了解。此次调查需要注意的是，7个地区的调查地点除广州与兰坪外，其他5个地区的地点都选在某些饭店，其针对性较强；广州选择的地点

45、在某一公园，兰坪的调查地点在县城街道。地点选择的不一致也可能会给调查结果产生一定的影响。3.2 调查对象对蝉花保健品的态度 结合总体来看，42.8%的人群倾向于口服液包装，其次为胶囊，并多数表示愿意尝试。这对于蝉花的市场开发提供了一定的方向，也显示出蝉花保健品潜在的市场前景。3.3 建议 对未来蝉花消费调研的建议，像漳州、南靖的调查，应该适当的增加调查表的发放，以增加样本的含量。调查对象应该注意人群分布特征的基本平衡，比如避免男女调查比例的失衡。另外采取偶遇调查也会造成偏倚，应当采取随机调查。由此次调查结果显示，调查对象多数是在朋友告知的情况下认识蝉花的，不到10%的人是通过书籍、电视、网络等途径了解蝉花，因此，可以考虑加大这方面科普知识的宣传力度，让更多的人认识并了解蝉花，更易接受蝉花作为新资源的保健功能食品，也能推动蝉花保健产品的市场发展。3.4 探讨蝉花产业现状与发展