生化实验六 过氧化氢酶米氏常数的测定.docx

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1、南京大学生命科学学院11级拔尖班张茜 111070094过氧化氢酶米氏常数的测定生命科学学院 11级拔尖班111070094 张茜一、 实验目的1. 了解米氏常数的测定方法2. 学习提取生物组织中的酶二、 实验原理1. 实验中的反应H2 O2 被过氧化氢酶分解出 H2O 和 O2 , 未分解的 H2O2 用 KMnO4 在酸性环 境中滴定, 根据反应前后的浓度差可以算出反应速度: 4 / 42H2O2酶 2H2O + O2 2KMnO4+5H2O2+3H2SO4 2MnO4+K2SO4+8H2O+5O2 本实验以马铃薯提供过氧化氢酶, 以 1/v 1/S 作图求 Km.2. 米氏反应动力学米氏

2、方程 (Michaelis-Menten Equation):三、 实验试剂1. 0.02mol/L 磷酸缓冲溶液 (pH=7.0): 实验室提供.2. 酶液: 称取马铃薯 5g, 加缓冲液 10mL, 匀浆过滤.3. 0.01107mol/L 高锰酸钾.4. 0.098mol/L H2O2.5. 25%H2SO4.四、 实验操作取 6 只锥形瓶, 按 表 1 的顺序加入试剂.先加好过氧化氢和蒸馏水, 加酶液后立即混合, 依次记录各瓶的起始反应时间. 反映到达 5min 立即加入硫酸终止反应, 充分混匀. 用 0.0109mol/L 的 KMnO4 溶 液滴定瓶中剩余的过氧化氢至微红色, 记录消耗的高锰酸钾体积.五、 实验结果与讨论1. 实验结果管号012345实际消耗KMnO4/mL0.002.993.935.447.9415.89v/(mmol/min)00.004740.003670.005460.00730.00844S/(mol/L)00.0098 0.0123 0.01640.02450.0490 1/v327.8 364.0 381.4 197.9 99.51/S102.0 81.6 61.1 40.8 20.4 表 2: 实验结果和计算结果Km = 斜率/截距=0.03479