药物分析中常用化学检验方法与操作规程.doc

1、药物分析中常用化学检验方法与操作规程在药物的纯度检查和含量测定等分析检验工作中，一些专属、灵敏、准确的经典的化学方法一直发挥着重要作用。分析检验中均应按照标准规定的方法和计量检定合格的器具进行观测分析。药物分析中一些常用的化学检验方法的标准规定（标准操作规程）、方法原理、仪器用具、及注意事项等分别介绍如下。一、氯化物检查法（中国药典2000年版二部附录 A）1标准规定除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标

2、准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，即得。供试溶液如带颜色，除另有规定外，可取供试溶液两份，分置50ml比色管中，一份中加硝酸银试液1.0ml，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，作为对照溶液；另一份中加硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。标准氯化

3、钠溶液的制备 称取氯化钠0.165g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10g的Cl）。【附注】 用滤纸滤过时，滤纸中如含有氯化物，可预先用含有硝酸的水溶液洗净后使用。2方法原理 氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化银浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在同一条件下生成的氯化银浑浊液比较，以检查供试品中氯化物的限量。标准氯化钠溶液的取用量一般为5.08.0ml，通常为6.0ml。本法适用于药品中微量氯化物的限度检查。3仪器与用具 纳氏比色管50ml，应选玻璃质量较好、

4、配对、无色(尤其管底)、管的直径大小相等、管上的刻度高低一致的纳氏比色管进行实验。 4注意事项 (1) 供试溶液与对照溶液应同时操作，加入试剂的顺序应一致。 (2) 应注意按操作顺序进行，先制成40ml水溶液，再加入硝酸银试液1.0ml，以免在较大浓度的氯化物下局部产生浑浊，影响比浊。 (3) 应将供试品管与对照管同时置黑色台面上，自上而下观察浊度，较易判断。必要时，可变换供试管和对照管的位置后观察。 (4) 供试溶液与对照溶液在加硝酸银后，应在暗处放置5分钟，避免光线直接照射。 (5) 加入硝酸银试液后，应立即充分摇匀，以防止局部过浓而影响产生的浑浊。 (6) 供试溶液如不澄清，可预先用含硝

5、酸的水洗净滤纸中的氯化物，再滤过供试溶液，使其澄清。 (7) 纳氏比色管用后应立即用水冲洗，不应用毛刷刷洗，以免划出条痕损伤比色管。 二、硫酸盐检查法（中国药典2000年版二部附录 B） 1标准规定 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成约40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准硫酸钾溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25氯化钡溶液5ml，用水稀释至50ml，充分摇匀，放置10分钟，

6、同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，即得。 供试溶液如带颜色，除另有规定外，可取供试溶液两份，分置50ml纳氏比色管中， 一份中加25氯化钡溶液5ml，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准硫酸钾溶液与水适量使成50ml，摇匀，放置10分钟，作为对照溶液；另一份中加25氯化钡溶液5ml与水适量使成50ml，摇匀，放置10分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。 标准硫酸钾溶液的制备 称取硫酸钾0.181g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于100g的H2S04)。 2方法原理 硫酸盐在盐酸酸性溶液中与氯化钡作用

7、生成硫酸钡浑浊液，与一定量的标准硫酸钾溶液在同一操作条件下生成的浑浊液比较，以检查供试品中硫酸盐的限量。 标准硫酸钾溶液的取用量通常为2.0ml。 本法适用于药品中微量硫酸盐的限量检查。 3仪器与用具 纳氏比色管 50ml，应选玻璃质量较好、配对、无色（尤其管底）、管的直径大小相等、管上的刻度高低一致的纳氏比色管进行实验。 4注意事项 (1) 供试溶液如需过滤，应先用盐酸使成酸性的水洗净滤纸中可能带来的硫酸盐，再滤过供试溶液，使其澄清。 (2) 加入25氯化钡溶液后，应充分振摇，以免影响浊度。 (3) 25氯化钡溶液存放时间过久，如有沉淀析出，应取上清液使用。 (4) 应将供试品管与对照管同置

8、黑色台面上，自上而下观察浊度，较易判断。必要时，可变换供试品管和对照管的位置后观察。 (5) 纳氏比色管用后应立即用水冲洗，不应用毛刷刷洗，以免划出条痕损伤比色管。三、铁盐检查法（中国药典2000年版二部附录 G） 1标准规定 除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35ml后，加30硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成

9、35ml，加30硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得。 如供试管与对照管色调不一致时，可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇20ml提取，俟分层后，将正丁醇层移置50ml纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至25ml，比较，即得。 标准铁溶液的制备 称取硫酸铁铵FeNH4(S04)212H200.863g，置1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前,精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10g的Fe）。 2方法原理 药品中铁盐的检查，中国药典采用硫氰酸盐法。 利用硫氰酸盐在酸性溶液中

10、与三价铁盐生产红色的可溶性硫氰酸铁的配合物，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色，以检查供试品中硫酸盐的限量。 标准铁溶液的取用量通常为2.0ml。 本法适用于药品中微量铁盐的限量检查。 3仪器与用具 纳氏比色管50ml，应选玻璃质量较好、配对、无色（尤其管底）、管的直径大小相等、管上的刻度高低一致的纳氏比色管进行实验。 4注意事项 (1) 标准铁贮备液应存放在阴凉处，存放期如出现浑浊或其他异常情况时，不得再使用。 (2) 比色时，以白色背景，观测比较所产生的颜色。四、重金属检查法（中国药典2000年版二部附录 H）1标准规定重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。标

11、准铅溶液的制备 称取硝酸铅0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置l00ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每lml相当于10g的Pb）。配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。 第一法除另有规定外，取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水或各药品项下规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入按各药品项下规定的方法制成的供试液25m1；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各

12、2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。 如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该药品项下规定的二倍量的供试品和试液，加水或该药品项下规定的溶剂使成30ml，将溶液分成甲乙二等份，乙管中加水或该药品项下规定的溶剂稀释成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，经滤膜(孔径3m)滤过，然后甲管中加入标准铅溶液一定量，加水或该药品项下规定的溶剂使成25m1；再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法比较，即得。供试品如含高铁盐影响重金属检查时，可取该药品项下规定方法制成的供试溶液，加抗坏血酸0.5

13、1.0g，并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上述方法检查。配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过1.0ml（或与盐酸1.0ml相当的稀盐酸），氨试液超过2m1，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25 ml。 第二法 除另有规定外，取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸0.5 ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后(或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0 ml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气

14、除尽后，放冷，在500600炽灼使完全灰化)，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml；另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml；照上述第一法检查，即得。第三法 除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5ml与水20ml溶解后，置纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。 第四法仪器装置滤器由具有螺纹丝

15、扣并能密封的上下二部，以及垫圈、滤膜和尼龙垫网所组成。如下页图。 滤器示意图A为滤器上盖部分。入口处应能与50ml注射器紧密连接；B为连接头；c为垫圈(外径10mm，内径6mm)；D为滤膜。直径10mm，孔径3.O加1用前经在水中浸泡24小时以上；E为尼龙垫网(孔径不限)，直径10mm；F为滤器 下部，出口处套上一合适橡皮管。标准铅斑的制备 精密量取标准铅溶液一定量，置小烧杯中，用水或各药品项下规定的溶剂稀释成10ml，加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与硫代乙酰胺试液1.0ml，摇匀，放置10分钟，用50ml注射器转移至上述滤器中进行压滤（滤速约为每分钟1ml），滤毕，取下滤膜，放在滤纸上

16、干燥，即得。 检查法 取按各药品项下规定方法制成的供试溶10ml，照标准铅斑的制备，自“加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml”起，依法操作，将生成的斑点与标准铅斑比较，不得更深。 若供试溶液有颜色或浑浊，应用滤膜进行预滤，如滤膜上有污染，应换滤膜再滤，直至滤膜不再染色；然后取滤液10ml，照标准铅斑的制备，自“加入醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml”起，依法操作，并照上述检查法中所述比较，即得。2方法原理 重金属是指在规定实验条件下能与显色剂作用的金属盐类杂质。中国药典采用硫代乙酰胺试液或硫化钠试液作显色剂，以铅的限量表示。由于实验条件不同，分为四种检查方法。第一法：适用于供试品不经有机破坏，在

17、酸性溶液中显色的重金属限量检查；第二法：适用于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中显色的重金属限量检查； 、 第三法：用来检查能溶于碱而不溶于稀酸(或在稀酸中即生成沉淀)的药品中的重金属； 第四法：用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物沉淀富集成色斑，用于有色溶液或重金属限量低的品种。四种方法显示的结果均为重金属硫化物微粒均匀混悬在溶液中所呈现的颜色，采用滤膜法可获得“色斑”；如果重金属离子浓度大，加入显色剂后放置时间长，就会有硫化物聚集下沉。重金属硫化物生成的最佳pH值是3.03.5，选用醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml调节pH较好，显色剂硫代乙酰胺试液用量经实验也以2m

18、l为佳，显色时间一般为2分钟。以1020g Pb与显色剂所产生的颜色为最佳目视比色范围。在规定实验条件下，与硫代乙酰胺试液在弱酸条件下产生的硫化氢呈色的金属离子有：银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、锌、钴与镍等。 由于在药品生产过程中遇到铅的机会较多，且铅易积蓄中毒，故以铅作为重金属的代表，用硝酸铅配制标准铅溶液。3仪器与用具纳氏比色管 应注意选择各管之间的平行性，玻璃色泽一致，内径、刻度标线高度一致。比色管洗涤时避免划伤内壁。过滤器 见中国药典2000年版二部附录重金属检查法第四法附图，由具有螺纹丝扣并能密封的上、下二部分以及垫圈、滤膜和辅助滤板组成。4试药和试液 硫代乙酰胺试液、硫化钠试

19、液、醋酸盐缓冲液(pH3.5)与抗坏血酸等均按药典规定。稀焦糖溶液 取蔗糖或葡萄糖约5g，置磁坩埚中，在玻璃棒不断搅拌下，加热至呈棕色糊状，放冷，用水溶解成约25ml，滤过，贮于滴瓶中备用。临用时，根据供试液色泽深浅，取适当量调节使用。 5注意事项(1) 标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制，以防止硝酸铅水解而造成误差，配制标准铅溶液使用的玻璃仪器，均不得含有铅。 (2) 硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH值是3.5，故配制醋酸盐缓冲液（pH3.5）时，要用pH计调节，硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深；第四法中检测限度为25g的Pb，且体积小，所以用量为1.0ml。硫代

20、乙酰胺试液显色剂的最佳显色时间为2分钟，除第四法由于检测限量低，且为了方便过滤，显色时间为10分钟外，第一、二法均为放置2分钟。 (3) 为了便于目视比较，第一、二和三法中的标准铅溶液用量以2ml（相当于20g的Pb）为宜；小于1ml或大于3ml，呈色太浅或太深均不利于目视比较。 (4) 如需将炽灼残渣项下遗留的残渣作重金属检查时，则炽灼温度必须控制在500600。实验证明，炽灼温度在700以上时，多数重金属盐都有不同程度的损失；以铅为例，在700经6小时炽灼，损失达68。某些供试品(如安乃近，诺氟沙星等)在炽灼时能腐蚀瓷坩埚而带入较多的重金属，应改用石英坩埚或铂坩埚操作。(5) 炽灼残渣加硝

21、酸处理，必须蒸干，将亚硝酸除尽，否则亚硝酸会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢，因氧化析出乳硫，影响检查。蒸干后残渣加盐酸处理，使重金属转化为氯化物，在水浴上蒸干，除去多余盐酸，加水溶解，加入酚酞指示液1滴，再逐滴加入氨试液，边加边搅拌，直到溶液刚显浅红色为止，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)，使供试液的pH调节至3.5。(6) 供试品中如含有高铁盐，在弱酸性溶液中会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢进一步氧化析出乳硫，影响检查。可加入抗坏血酸将高铁离子还原为亚铁离子而消除干扰。 (7) 如供试品自身为重金属的盐，在检查这些药品中的其他重金属时，必须先将供试品本身的金属离子除去，再进行检查。如枸橼酸铁铵中检

22、查铅盐时，利用Fe3+在一定浓度的盐酸中形成HFeCl62-，用乙醚提取除去，再调节供试液至碱性，用氰化钾试液掩蔽微量的铁后进行检查；右旋醣酐铁注射液中重金属检查，也是在一定浓度的盐酸中，用醋酸异丁酯提取除去铁盐后进行检查。 (8) 药品本身生成的不溶性硫化物，影响重金属检查，可加入掩蔽剂以避免干扰。如硫酸锌和葡萄糖酸锑钠中铅盐检查，是在碱性溶液中加入氰化钾试液，或在中性溶液中加入酒石酸，使锌离子或锑离子生成稳定的络合物，再依法检查。(9) 为了消除盐酸或其他试剂可能夹杂重金属，故在配制供试品溶液时，如使用盐酸超过1.0ml（或与盐酸1.0ml相当的稀盐酸），或使用氨试液超过2ml，以及用硫酸

23、或硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。 (10) 当采用第四法时，将注射器套于滤器上后，让注射器内管自然下降，产生的压力比较均匀。而且对于大多数样品溶液过滤速度达到每分钟1ml左右、对于较粘稠的样品溶液，可施加一均匀压力使达到该速度，以保证色斑上色调的均匀性。滤过时如滤器中存在气泡则会影响色斑质量，故在装置辅助滤板、滤膜和垫圈时应以水排除气泡。滤器上端与注射器联接处的尺寸大小应以两者能严密嵌合为宜，以免滤过时溶液溢漏；必要时可改用乳胶管联接。五、砷盐检查法（中国药典2000年版二部附录 J） 1标准规定标准砷溶液的制备 称取三氧化二

24、砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于1g的As）。第一法（古蔡氏法） 仪器装置 如图1。A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞，上连导气管C（外径8.0mm，内径6.0mm)，全长约180mm；D为具孔的有机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一圆孔，孔径与导气管C的内径一致，其下部孔径与导气管C的外径相适应，将导气管C的顶端套入旋塞下部孔内，并使管壁与旋塞的圆孔

25、适相吻合，粘合固定；E为中央具有圆孔（孔径6.0mm）的有机玻璃旋塞盖，与D紧密吻合。测试时，于导气管c中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为6080mm），再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸(试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜)，盖上旋塞盖E并旋紧，即得。 标准砷斑的制备 精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置2540C水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。若供试品需经有机破坏后再行检砷，则应取标准砷溶液代替供试品，照各药品项下规

26、定的方法同法处理后，依法制备标准砷斑。检查法 取按各药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。第二法（二乙基二硫代氨基甲酸银法）仪器装置 如图2。A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞，上连导气管C（一端的外径为8mm，内径为6mm；另一端长180mm，外径4mm，内径1.6mm，尖端内径为1mm）。D为平底玻璃管（长180mm，内径10mm，于5.0ml处有一刻度）。测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度约80mm)，并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml。标准

27、砷对照液的制备 精密量取标准砷溶液5ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C与A瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入D管中，并将A瓶置2540水浴中反应45分钟，取出D管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。 若供试品需经有机破坏后再行检砷，则应取标准砷溶液代替供试品，照各药品项下规定的方法同法处理后，依法制备标准砷对照液。检查法 取照各药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷对照液的制备，自“再加碘化钾试液5ml”法操作。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察、比较，所得溶液的颜色不得

28、比标准砷对照液更深。必要时，可将所得溶液转移至1cm吸收池中，用适宜的分光光度计或比色计在510nm波长处以二乙基二硫代氨基甲酸银试液作空白，测定吸收度，与标准砷对照液按同法测得的吸收度比较，即得。 2方法原理 砷盐检查法适用于药品中微量砷盐(以AS计算)的限量检查。砷盐检查法中的第一法(古蔡氏法)用作药品中砷盐的限量检查；第二法(二乙基二硫代氨基甲酸银法)既可检查药品中砷盐限量，又可测定含量；两法并列，可根据需要选用。古蔡氏法是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢与药品中微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与同一条件下定量标准砷溶液所产生的砷斑比较，以判定砷

29、盐的限量。 二乙基二硫代氨基甲酸银法是将生成的砷化氢气体导入盛有二乙基二硫代氨基甲酸银试液的管中，使之还原为红色胶态银，与同一条件下定量的标准砷溶液所制成的对照液比较，或在510nm波长处测定吸收度，以判定含砷盐的限度或测定含量。 3试药与试液 碘化钾试液 按药典规定，应临用新配。 酸性氯化亚锡试液 按药典规定，配成后3个月即不适用。 乙醇制溴化汞试液 按药典规定，应置棕色磨口塞坡璃瓶内，在暗处保存。 溴化汞试纸 取质地较疏松的中速定量滤纸条浸入乙醇制溴化汞试波中，1小时后取出，在暗处干燥，即得。本试纸宜置棕色磨口塞玻璃瓶内保存。 锌粒 以能通过1号筛的细粒无砷锌为宜，如使用锌粒较大时，用量酌

30、情增加，反应时间亦应延长为1小时。 醋酸铅棉花 取脱脂棉，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液中，湿透后，沥去过多的溶液，并使之疏松，在100以下干燥后，贮于磨口塞玻璃瓶中备用。 二乙基二硫代氨基甲酸银试液 按药典规定。本液应置棕色玻璃瓶中，密塞，置阴凉处保存。 4注意事项 (1) 所用仪器和试液等照本法检查，均不应生成砷斑，或经空白试验至多生成仅可辨认的斑痕。 (2) 本法所用锌粒应无砷，以能通过一号筛的细粒为宜，如使用的锌粒较大时，用量应酌情增加，反应时间亦应延长为1小时。 (3) 醋酸铅棉花系取脱脂棉1.0g，浸入醋酸铅试液与水的等容混合液12ml中，湿透后，挤压除去过多的溶液，并使之疏松，在

31、100以下干燥后，贮于玻璃塞瓶中备用。 (4) 导气管C中装入醋酸铅棉花时，取醋酸铅棉花适量(60l00mg)，拉成疏松状，每次少量，用细玻璃棒均匀地装入导气管c中，松紧要适度，装管高度为6080mm。 (5) 新购置的仪器装置，在使用前应检查是否符合要求。可将所使用的仪器装置依法制备标准砷斑，所得砷斑应呈色一致。同一套仪器应能辨别出标准砷溶液1.5ml与2.0ml所呈砷斑的深浅。 (6) 制备标准砷斑或标准砷对照液，应与供试品检查同时进行。因砷斑不稳定，反应中应保持干燥及避光，并立即比较。标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备液存放时间一般不宜超过一年。 (7) 第一法（古蔡氏法）反应灵敏度

32、约为0.75g（以As计），砷斑色泽的深度随砷化氢的量而定，药典规定标准砷斑为2ml标准砷溶液（相当于2g As）所形成的色斑，此浓度得到的砷斑色度适中，清晰，便于分辨，供试品规定含砷限量不同时，采用改变供试品取用量的方法来适应要求，而不采用改变标准砷溶液取量的办法。 (8) 药品中存在的微量砷盐常以三价的亚砷酸盐或五价的砷酸盐形式存在，五价的砷生成砷化氢比三价砷慢。故先加入碘化钾和氯化亚锡为还原剂，使五价砷还原为三价砷。 (9) 如供试品中存在锑盐，将干扰砷盐检查。所以本法不适用供试品为锑盐中砷盐检查。但在药典规定的实验条件下，100g的锑存在不致于干扰测定。实验中加入氯化亚锡不仅有效地抑制

33、锑的干扰，防止锑化氢与溴化汞试纸作用生成锑斑或与二乙基二硫代氨基甲酸银试液反应，干扰砷盐检查；还可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，均匀连续地使产生新生态的氢，使砷盐还原为砷化氢，有利于砷斑的形成。(10) 供试品和锌粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生H2S气体，干扰实验，故用醋酸铅棉花吸收除去H2S；因此，导气管中的醋酸铅棉花，要保持疏松、干燥，不要塞入近下端。 (11) 浸入乙醇制溴化汞试液的滤纸的质量，对生成砷斑的色泽有影响，用定性滤纸，所显砷斑色调较暗，深浅梯度无规律；用定量滤纸质地疏松者，所显砷斑色调鲜明，梯度规律，因此必须选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；溴化

34、汞试纸一般宜新鲜制备。(12) 锌粒大小影响反应速度，为使反应速度及产生砷化氢气体适宜，选2mm左右粒径的锌粒。反应温度一般控制在30左右，冬季可置温水浴中。如反应太快，宜适当降低反应温度，使砷化氢气体能被均匀吸收。(13) 如供试品为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将高铁离子还原为低价铁而除去干扰。如枸橼酸铁铵的砷盐检查。 (14) 有机药品中的砷盐检查可溶于水的脂肪族有机酸如枸橼酸、乳酸及其盐、氨基己酸与葡萄糖酸钙等，一般可不经有机破坏而直接依法检查砷盐；多数环状结构的有机药物，因砷与杂环分子可能以共价键结合，需先行有机破坏，否则检出结果偏低或难以检出。有机破坏时，所用试剂的含砷量如超过1弘

35、g，除另有规定外，应取同量的试剂按供试品同样处理，最后加入标准砷溶液一定量，制备标准砷斑或标准砷对照液，进行比较。 (15) 如供试品为硫化物、亚硫酸盐或硫代硫酸盐等，则在酸性溶液中可生成大量硫化氢或二氧化硫气体，干扰检查；可加硝酸使氧化成硫酸盐以除去干扰，如硫代硫酸钠中砷盐检查。 (16) 在二乙基二硫代氨基甲酸银法中，需要加入一定量的有机碱以中和反应中的二乙基二硫代氨基甲酸；USP配制成0.5二乙基二硫代氨基甲酸银的吡啶溶液，其缺点是吡啶有恶臭；中国药典采用含1.8三乙胺和0.25二乙基二硫代氨基甲酸银的氯仿溶液，呈色稳定性及试剂稳定性均好，低毒，无臭，与砷化氢产生的颜色在510nm波长处

36、有最大吸收。如遇室温低，按法操作，标准砷对照液不显色，可将D管置2540水浴加温使显色。 (17) 二乙基二硫代氨基甲酸银试液在配制后两周内稳定。当供试液中含砷（As）0.757.5g时显色反应的线性关系良好，2小时内稳定，重现性好。本法操作时由于砷化氢气体导入盛有准确5ml的二乙基二硫代氨基甲酸银试液中，在2540水浴中反应45分钟后，有部分氯仿挥发，比色前应添加氯仿至5.00ml，摇匀，比色。因二乙基二硫代氨基甲酸银试液带浅黄绿色，测吸收度时要用此试液作空白。六、炽灼残渣检查法（中国药典2000年版二部附录 N）1标准规定取供试品1.02.0g或各药品项下规定的重量，置已炽灼至恒重的坩埚中

37、，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；除另有规定外，加硫酸0.51ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700800炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700800炽灼至恒重，即得。如需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度必须控制在500600。 2方法原理 药品（多为有机化合物）经高温加热分解或挥发后遗留下不挥发的无机物，经加硫酸并炽灼（700800）后生成金属氧化物或其硫酸盐即为炽灼残渣。 3仪器与用具高温炉（马福炉）、坩锅（瓷坩锅、铂坩锅、石英坩锅）、坩锅钳、通风柜。4操作方法(1) 空坩锅恒重 取坩锅置于高温炉内，将盖子斜盖在坩锅上，经700800炽灼约306

38、0分钟，取出坩锅，稍冷片刻，移置干燥器内并盖上盖子，放冷至室温（一般约需60分钟），精密称定坩锅重量。再在上述条件下炽灼约30分钟，取出，置干燥器内，放冷，称量；直至恒重，备用。以上炽灼操作也可使用煤气灯进行。(2) 称取供试品 取供试品1.02.0g或各药品项下规定的重量，置已炽灼至恒重的坩锅内，精密称定。(3) 炭化 将盛有供试品的坩锅斜置电炉或煤气灯上缓缓灼烧（避免供试品骤然膨胀而逸出），炽灼至供试品全部炭化呈黑色，并不冒浓烟，放冷至室温。“炭化”操作应在通风柜内进行。(4) 灰化 除另有规定外，滴加硫酸0.51.0ml，使炭化物全部湿润，继续在电炉或煤气灯上加热至硫酸蒸气除尽，白烟完全

39、消失（以上操作应在通风柜内进行），将坩锅移置高温炉内，盖子斜盖于坩锅上，在700800炽灼约60分钟，使供试品完全灰化。(5) 恒重 按操作方法1)自“取出坩埚，稍冷片刻”起，依法操作，直至恒重。以上炽灼操作也可借助煤气灯进行。5注意事项(1) 供试品的取用量应根据炽灼残渣限度来决定，一般规定炽灼残渣限度为0.10.2，应使炽灼残渣的量在l2mg之间，故供试品取量多为1.02.0g，炽灼残渣限度较高或较低的药品，可酌情减少或增加供试品的取量。(2) 同时进行多份炽灼残渣检查时，坩锅宜预先编码标记，盖子与坩锅应编码一致。坩锅从高温炉取出的先后次序，在干燥器内的放冷时间，以及称量顺序，均应前后一致

40、；每一干燥器内同时放置坩锅最好不超过4个，否则不易恒重。 (3) 如需将炽灼残渣留作重金属检查，则炽灼温度必须控制在500600。(4) 计算结果，按有效数字数值修约规程修约，使与标准中规定限度的有效位数一致，其数值小于或等于限度时，判为符合规定；其数值大于限度时，判为不符合规定。(5) 恒重，除另有规定外，系指连续两次炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量。炽灼至恒重的第二次称量，应在连续炽灼30分钟后进行。七、易炭化物检查法（中国药典2000年版二部附录 O）1标准规定 取内径一致的比色管两支：甲管中加各品种项下规定的对照液5ml；乙管中加硫酸含H2S04 94.595.5(g/g)5ml

41、后，分次缓缓加入规定量的供试品，振摇使溶解。除另有规定外，静置15分钟后，将甲乙两管同置白色背景前，平视观察，乙管中所显颜色不得较甲管更深。供试品如为固体，应先研成细粉。如需加热才能溶解时，可取供试品与硫酸混合均匀，加热溶解后，放冷至室温，再移置比色管中。 2方法原理 易炭化物检查法，是检查药品中夹杂有遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的有机杂质。检查时，将一定量的供试品加入硫酸中溶解后，静置，产生的颜色与标准比色液（或用比色用重铬酸钾溶液、比色用硫酸铜溶液或比色用氯化钴溶液配制的对照液）比较，以控制易炭化物限量。 3试药与试液 硫酸：含H2SO4 94.595.5（g/g），要防止硫酸吸水改变浓度，

42、必要时应标定。各种色调色号标准比色溶液、比色用重铬酸钾溶液，比色用硫酸铜溶液，比色用氯化钴溶液与高锰酸钾溶液（0.02ml/L）均按药典规定配制。 4注意事项 (1) 比色管应洁净，如乙管中加硫酸后，在加供试品之前已显色，应重新洗涤比色管，干燥后再使用。 (2) 乙管必须先加硫酸而后再加供试品，以防供试品粘结在管底，不易溶解完全。 (3) 必须分次向乙管缓缓加入供试品，边加边振摇，使溶解完全；避免因一次加入量过多导致供试品结成团，被硫酸炭化液包裹后溶解很困难。 (4) 如药典规定需加热才能溶解时，可取供试品与硫酸混合均匀，放冷至室温，再移置比色管中；加热条件，应严格按药典规定。(5) 易炭化物与硫酸呈现的颜色，与硫酸浓度、温度和放置时间有关，操作中应对实验条件严格控制。